Методы проведения исследования на наличие транслокации ALK, используемые в клинической практике

Диагностическое исследование при ALK-положительном НМРЛ выявляет перестройку гена ALK

При ALK-положительном НМРЛ ген ALK подвергается перестройке в хромосоме, что приводит к экспрессии онкогенного химерного белка ALK¹^–4

рис. 1

Перестройка гена ALK может быть обнаружена на генном или белковом уровне⁵

Существует ряд диагностических тестов для выявления пациентов с ALK-положительным НМРЛ

Исследование на наличие транслокации гена ALK может проводиться с использованием клинически достоверных диагностических методов, включая ИГХ (иммуногистохимию), FISH и ОТ-ПЦР или технологий на основе NGS

Клинические рекомендации

Полезные ссылки

Полезные материалы

рис. 2

ИГХ выявляет перестройки ALK на белковом уровне⁵

рис. 3

FISH выявляет перестройки ALK на генном уровне⁵

рис. 4

ОТ-ПЦР может использоваться для выявления перестроек ALK на уровне РНК⁵

рис. 5

NGS может использоваться для выявления перестроек гена ALK на уровне ДНК⁶

ИГХ исследование выявляет экспрессию белков слияния ALK

рис. 6

При ИГХ используются антитела для обнаружения клеток, экспрессирующих химерный белок ALK^5,7
В отсутствие ALK-положительного заболевания, белок ALK обычно экспрессируется в легочной ткани на низком или неопределяемом уровне⁵
Для повышения чувствительности теста и учета вариабельности используются методы амплификации⁵
Во время ИГХ химерный белок слияния ALK окрашивается и визуализируется с помощью микроскопии и оценивается врачом патологоанатомом⁵
По сравнению с FISH, ИГХ продемонстрировало 90%-ную чувствительность, 96%-ную специфичность и 93%-ную точность⁸

Определение экспрессии ALK с помощью ИГХ является предиктором ответа на таргетную терапию

ИГХ тест VENTANA ALK (D5F3)* — это прогностический тест для определения пациентов, которым показана таргетная терапия ИТК ALK.

ИГХ тест VENTANA* ALK (D5F3) является тестом на ALK с маркировкой CE-IVD и одобренным FDA,^9,10
что служит показателем прохождения клинической валидации.

Этот тест используется в клинических исследованиях фазы III алектиниба (ALEX),³ церитиниба (ASCEND-4)⁴ и бригатиниба (ALTA-1L)⁵ для выявления пациентов с ALK-положительным НМРЛ.

рис. 6

Интенсивность окрашивания может быть зафиксирована как:^9,14

ИГХ ALK-отрицательная: 0 (без окрашивания)
ИГХ ALK-положительная: от «1+» до «3+» (от слабого до сильного окрашивания)

* Ventana anti-ALK (D5F3) Rabbit Monoclonal Primary Antibody №РЗН 2020/9786 от 25.03.2020

FISH-тест выявляет экспрессию гена ALK с перестройками

рис. 8

FISH-тест включает использование флуоресцентно меченных ДНК-зондов, которые связываются с определенными участками ДНК в гене, представляющем интерес¹⁵
Это позволяет визуализировать слияния ALK с помощью микроскопии⁵
Слияния ALK можно диагностировать на основании рисунка флуоресцентных зондов:¹⁵
- В нормальных клетках эти два сигнала близки друг к другу (красный/зеленый) или частично накладываются друг на друга (желтый)
- В ALK+ клетках, где произошла перестройка гена, два сигнала расходятся и наблюдаются как расщепленные сигналы или удаленные (отсутствующие); одиночные красные сигналы также могут указывать на положительный результат теста FISH

Метод ОТ-ПЦР выявляет транслокации ALK на уровне РНК

рис. 9

ОТ-ПЦР может использоваться для выявления транслокаций гена ALK на уровне РНК⁵
В отсутствие ALK-положительного заболевания, белок ALK обычно экспрессируется в легочной ткани на низком или неопределяемом уровне⁵
Когда ALK сливается с EML4 (или другими партнерами по слиянию), образующиеся ALK-положительные опухолевые клетки содержат высокие уровни мРНК со слиянием ALK⁵

В некоторых случаях используется ОТ-ПЦР, хотя он не позволяет обнаружить слияния гена ALK с новыми партнерами16, а высококачественную РНК трудно получить в условиях рутинной практики5

NGS позволяет проводить параллельное секвенирование нескольких генов в рамках одного теста

рис. 10

NGS обладает высокой чувствительностью¹⁷ и может проводиться с использованием ДНК, выделенной из тканей, или других типов образцов, таких как кровь или цкДНК⁵
NGS может предоставить информацию об отдельных генах, таких как
ALK, или полный транскрипт образца в рамках одного теста⁵
Преимущества параллельного секвенирования нескольких генов в рамках одного теста с помощью NGS включают:
- более быстрые результаты по сравнению с текущей клинической практикой последовательного тестирования, но более длительное ожидание результатов по сравнению с отдельными тестами, проводимыми методами ИГХ или FISH
- менее инвазивный метод, если используются циркулирующие биомаркеры

NGS является новой технологией для исследований на ALK19

Существуют преимущества и ограничения каждого исследования на биомаркеры

рис. 11

Телефон горячей линии проекта «Молекулярная диагностика»

8-800 600-36-70

По будням c 6:00 до 18:00 (МСК) (звонок бесплатный)

Узнать больше о проекте

Центры диагностики

ALK — киназа анапластической лимфомы; НМРЛ — немелкоклеточный рак легкого; FISH — флуоресцентная гибридизация in situ; ИГХ — иммуногистохимия; NGS — секвенирование нового поколения; ОТ-ПЦР — полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой; CE-IVD — соответствие европейскому стандарту диагностики in vitro; FDA — Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США; EML4 — белок, подобный белку иглокожих, ассоциированному с микротрубочками, тип 4; кДНК — комплементарная ДНК; цкДНК — свободно-циркулирующая ДНК;

1. Soda, et al. Nature 2007;
2. Hallberg, et al. Nat Rev Cancer 2013
3. Rikova, et al. Cell 2007
4. Shin, et al. J Thorac Dis 2018
5. IASLC Atlas of ALK Testing 2016
6. Clark, et al. J Mol Diagn 2018
7. VENTANA OptiView Detection Kit package insert 2011
8. Wynes, et al. J Thorac Oncol 2014
9. VENTANA ALK (D5F3) CDx Assay (FDA approved) 2020
10. VENTANA Anti-ALK (D5F3) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (CE-IVD marked) 2020
11. Peters, et al. N Engl J Med 2017;
12. Soria, et al. Lancet 2017
13. Camidge, et al. N Engl J Med 2018;
14. Chiang, et al. Sci Rep 2016
15. Weickhardt, et al. Cancer 2013;
16. NCCN NSCLC guidelines V8.2020 17. Letovanec, et al. J Thorac Oncol 2018;
18. Grada & Weinbrecht. J Invest Dermatol 2013;
19. Planchard, et al. Ann Oncol 2020
20. Dako Immunohistochemical Staining Methods Education Guide 2013
21. Han, et al. Clin Breast Cancer 2016;
22. Song, et al. Cancer Med 2016
23. Raja, et al. Pharmaceut Med 2017;
24. Cummings, et al. Clin Transl Sci 2016
25. Van de Wekken et al, Feb. 2017

M-RU-00004579 Октябрь 2021