Методы проведения исследования на наличие транслокации ALK, используемые в клинической практике

Диагностическое исследование при ALK-положительном НМРЛ выявляет перестройку гена ALK

При ALK-положительном НМРЛ ген ALK подвергается перестройке в хромосоме, что приводит к экспрессии онкогенного химерного белка ALK^1–4

Перестройка гена ALK может быть обнаружена на генном или белковом уровне⁵

Существует ряд диагностических тестов для выявления пациентов с ALK-положительным НМРЛ

Исследование на наличие транслокации гена ALK может проводиться с использованием клинически достоверных диагностических методов, включая ИГХ (иммуногистохимию), FISH и ОТ-ПЦР или технологий на основе NGS

ИГХ исследование выявляет экспрессию белков слияния ALK

• При ИГХ используются антитела для обнаружения клеток, экспрессирующих химерный белок ALK^5,7
• В отсутствие ALK-положительного заболевания, белок ALK обычно экспрессируется в легочной ткани на низком или неопределяемом уровне⁵
• Для повышения чувствительности теста и учета вариабельности используются методы амплификации⁵
• Во время ИГХ химерный белок слияния ALK окрашивается и визуализируется с помощью микроскопии и оценивается врачом патологоанатомом⁵
• По сравнению с FISH, ИГХ продемонстрировало 90%-ную чувствительность, 96%-ную специфичность и 93%-ную точность⁸

Определение экспрессии ALK с помощью ИГХ является предиктором ответа на таргетную терапию

ИГХ тест VENTANA ALK (D5F3)* — это прогностический тест для определения пациентов, которым показана таргетная терапия ИТК ALK.

ИГХ тест VENTANA* ALK (D5F3) является тестом на ALK с маркировкой CE-IVD и одобренным FDA,^9,10
что служит показателем прохождения клинической валидации.

Этот тест используется в клинических исследованиях фазы III алектиниба (ALEX),³ церитиниба (ASCEND-4)⁴ и бригатиниба (ALTA-1L)⁵ для выявления пациентов с ALK-положительным НМРЛ.

Интенсивность окрашивания может быть зафиксирована как:^9,14

• ИГХ ALK-отрицательная: 0 (без окрашивания)
• ИГХ ALK-положительная: от «1+» до «3+» (от слабого до сильного окрашивания)

* Ventana anti-ALK (D5F3) Rabbit Monoclonal Primary Antibody №РЗН 2020/9786 от 25.03.2020

FISH-тест выявляет экспрессию гена ALK с перестройками

• FISH-тест включает использование флуоресцентно меченных ДНК-зондов, которые связываются с определенными участками ДНК в гене, представляющем интерес¹⁵
• Это позволяет визуализировать слияния ALK с помощью микроскопии⁵
• Слияния ALK можно диагностировать на основании рисунка флуоресцентных зондов:¹⁵
  • В нормальных клетках эти два сигнала близки друг к другу (красный/зеленый) или частично накладываются друг на друга (желтый)
  • В ALK+ клетках, где произошла перестройка гена, два сигнала расходятся и наблюдаются как расщепленные сигналы или удаленные (отсутствующие); одиночные красные сигналы также могут указывать на положительный результат теста FISH

Метод ОТ-ПЦР выявляет транслокации ALK на уровне РНК

• ОТ-ПЦР может использоваться для выявления транслокаций гена  ALK на уровне РНК⁵
• В отсутствие ALK-положительного заболевания, белок ALK обычно экспрессируется в легочной ткани на низком или неопределяемом уровне⁵
• Когда ALK сливается с EML4 (или другими партнерами по слиянию), образующиеся ALK-положительные опухолевые клетки содержат высокие уровни мРНК со слиянием ALK⁵

NGS позволяет проводить параллельное секвенирование нескольких генов в рамках одного теста

• NGS обладает высокой чувствительностью¹⁷ и может проводиться с использованием ДНК, выделенной из тканей, или других типов образцов, таких как кровь или цкДНК⁵
• NGS может предоставить информацию об отдельных генах, таких как
  ALK, или полный транскрипт образца в рамках одного теста⁵
• Преимущества параллельного секвенирования нескольких генов в рамках одного теста с помощью NGS включают:
  • более быстрые результаты по сравнению с текущей клинической практикой последовательного тестирования, но более длительное ожидание результатов по сравнению с отдельными тестами, проводимыми методами ИГХ или FISH
  • менее инвазивный метод, если используются циркулирующие биомаркеры

Существуют преимущества и ограничения каждого исследования на биомаркеры